2014/9/15
困難梭狀桿菌感染的檢驗方法和臨床判讀
李岱芬
困難梭狀桿菌(Clostridium difficile)是一種厭氧性革蘭陽性桿菌，在臨床上主要是造成胃腸道的感染，其症狀可為無症狀的移生或輕微無併發症的腹瀉，到嚴重的腹瀉、偽膜性大腸炎(pseudomembranous colitis)、毒性巨結腸症(toxic megacolon)等，嚴重時也會造成病人的敗血症，甚至死亡。
近年來，困難梭狀桿菌導致疾病的病例數逐年上升，疾病嚴重度也有加重的趨勢，學者指出，此與抗生素使用型態的改變、致病力較強與抗藥性的菌株出現、宿主因素與免疫狀態的改變等有關。美國疾病管制局於2013年的統計資料中顯示，一年內約有25萬人感染，其中有一萬四千人因此疾病而死亡，且多花費的醫療照護費用更高達一兆元。故醫療照護單位對於困難梭狀桿菌的檢驗與後續感染隔離措施需有良好的方針，可儘早且正確的診斷此疾病，避免感染之漫延和惡化。
傳統檢驗中，實驗室可以使用選擇性培養基CCFA (cycloserine, cefoxitin, fructose agar)進行困難梭狀桿菌的培養，此方法的敏感度為89-100 %，特異性為84-99 %，但因此方法無法檢測困難梭狀桿菌的毒性，需使用其他方法再進行毒性檢測。
實驗室檢測困難梭狀桿菌的毒性的方法有：Cell Cytotoxicity Neutralization Assays、Toxigenic Anaerobic Culture、Glutamate Dehydrogenase (GDH) antigen detection和核酸檢測法(Nucleic acid amplification test, NAAT)等方法。其中Toxigenic Anaerobic Culture的方法為先進行困難梭狀桿菌的培養，待菌落生長後再進行細胞毒性檢測(Cytotoxicity assay)，為標準方法，但其需耗費的檢驗時間約為四天，不符合臨床時效需求。
現行常用於篩檢困難梭狀桿菌的方法為GDH antigen detection。困難梭狀桿菌會分泌出GDH，若於糞便檢體中檢測出GDH再使用酵素免疫法(EIA)的方式確認困難梭狀桿菌是否具有毒性，此檢驗方法僅需一小時，且其敏感度為78-95%，特異性為97-100%。但若檢測結果GDH與毒性測試結果不一致時，需再使用核酸檢測法進行確認。核酸檢測法的敏感度為93-100%，特異性為94-98%，所需時效因儀器設備之不同約為1~4小時，但其所需檢驗試劑成本相對較高。
美國微生物協會於2010年的指引中建議：
1.對於24小時內、腹瀉超過3次的病人可執行困難梭狀桿菌毒性測試。
2.因敏感性不佳，不建議單獨使用毒性測試診斷困難梭狀桿菌的感染。
3.GDH檢測因其有高敏感性與陰性預測值，為很好的篩檢方法。
4.當GDH結果為陽性，需再檢測毒性結果。若毒性結果亦為陽性，可報告為具有毒性困難梭狀桿菌。若GDH與毒性測試結果不一致時(一陰一陽)，需再使用核酸檢測法進行確認。
5.實驗室可單獨使用核酸檢測法偵測困難梭狀桿菌的毒性基因。
臨床檢驗單位應考量試劑敏感度、檢驗時效性、人員訓練、儀器設備與試劑成本後，選擇適合的檢驗方法，以提供臨床醫療照護快速且正確之報告，並降低醫院病人困難梭狀桿菌感染的風險。
